A Low-Cost Approach to PCR: Appropriate Transfer of Biomolecular Techniques

Name: A Low-Cost Approach to PCR: Appropriate Transfer of Biomolecular Techniques
Author: Harris, Eva
ISBN: 9780195119268

Harris, Eva

Lingua: inglese

Editore: Oxford University Press, 1999

0195119266 / 9780195119268

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This text provides a description of the theoretical basis of polymerase chain reaction (PCR) and practical details of the method. It serves as a guide for potential users in developing countries and for scientists in developed countries who may wish to work abroad. Num Pages: 328 pages, halftones. BIC Classification: PDN; PSAK1. Category: (P) Professional & Vocational. Dimension: 235 x 156 x 19. Weight in Grams: 558. . 1999. Illustrated. paperback. . . . .

Codice articolo V9780195119268

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Titolo: A Low-Cost Approach to PCR: Appropriate Transfer of Biomolecular Techniques
Autore: Harris, Eva
Editore: Oxford University Press
Anno di pubblicazione: 1999
Condizione: New
Rilegatura: Brossura
Lingua: inglese
ISBN 10: 0195119266
ISBN 13: 9780195119268

Contenuti

1 Introduction
2 PCR Technology
2.1: Description of the Technique
2.1.1: Historical Overview
2.1.2: The Molecular Basis of PCR
2.1.3: Advantages and Disadvantages
2.2: Technical Details
2.2.1: Components of the PCR Mixture
2.2.2: Thermal Cycling Parameters
2.2.3: Optimizing
2.2.4: Potential Problems
2.2.5: Detection of Products
2.3: Frequently-Used PCR-Based Techniques
3 Principles of Sustainable Technology Transfer
3.1: A Low-Cost Methodology
3.1.1: Appropriate Technology
3.1.2: Alternative Techniques
3.1.3: Simplification of Protocols
3.1.4: In-House Preparation of Reagents
3.1.5: Recycling
3.1.6: Donated Materials
3.2: Knowledge-Based Participatory Transfer Process
3.3: Appropriate Application
3.3.1: General Considerations
3.3.2: An Evaluation Framework
3.3.3: Assessment Criteria for PCR
3.3.4: Case-by-Case Evaluation of PCR Applied to Infectious Diseases
3.4: Intra-Reginal Cooperation
4 Case Study: The AMB/ATT Program
4.1: Introduction
4.2: Program Description
4.2.1: Objectives
4.2.2: Format
4.3: Program Structure
4.3.1: Phase I
4.3.2: Phase II
4.3.3: Phase III
4.4: Program Development
4.5: Examples of Projects
4.6: International Courses
II Selected Protocols
5.1: PCR Protocols
5.1.1: Overview
5.1.2: Equipment, Materials, Control, and Procedures Common to All PCR Protocols
5.1.3: Dengue Virus
5.1.4: New World Leishmania
5.1.5: Mycobactrium tuberculosis
5.1.6: Plasmodium falciparum and Plasmodium vivax
5.1.7: Vibrio cholerae
5.1.8: Diarrheagenic E. coli and Shigella
5.1.9: Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae
5.1.10: Leptospira
5.1.11: Trypanosoma cruzi
5.2: Nonradioactive DNA Probes: V. cholerae Colony Blot
5.2.1: Labeling the Probe Using PCR
5.2.2: Preparation of the Colony Blot
5.2.3: Hybridization
5.2.4: Visualization
6 Rapid Cloning of PCR Products
6.1: Primer Design
6.2: Preparation of PCR Products for Cloning
6.2.1: Digestion of Vector and PCR Products
6.2.2: Preparative Agarose Gel
6.2.3: Purification of the Excised DNA Fragments Using Silica Particles
6.3: Ligation
6.3.1: Checking DNA Fragment Concentration by Agarose Gel Electrophoresis
6.3.2: Ligation Reaction
6.4: Preparation of Competent Cells and Transformation
6.4.1: Preparation of Competent Cells
6.4.2: Transformation
6.5: Checking Clones by PCR
6.6: Plasmid Purification
6.7: Analysis of Clones by Restriction Enzyme Digestion
6.8: Agarose Gel Electrophoresis
III Appendix
A. Construction of Laboratory Equipment
B. In-House Preparation of Reagents
B.1 Useful Formulas
B.2 Solutions
B.3 Preparation of Selected Reagents
B.4 DNA Size Markers
C. Inventory for a PCR Laboratory
D. Good Laboratory Practice
D.1 General Tips
D.2 Calibration of Adjustable Pipettors
E. Prevention of Cross-Contamination
F. PCR Troubleshooting Guide and Flow-Chart
G. Workshop Organization and Teaching Tips
H. Sample Charts and Worksheets
I. Useful World Wide Web Sites

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