Edited by the inventor of polymerase chain reaction (PCR) and the 1993 Nobel Prize winner in Chemistry, Kary Mullis, as well as two experts in the field, this handbook provides up-to-date methodological protocols from the world's leading laboratories, in addition to new techniques and enhanced applications not yet available in book form. Nearly 40 chapters inform the novice and experienced PCR user on how to optimize their results. In the chapters on applications, researchers provide not only protocols, but also descriptions of how PCR has revolutionized their particular field. Future enhancements of PCR, as well as new potential uses, are discussed. Readers can learn how PCR has changed the face of diagnostic testing, cancer research, genetics, forensics, plant biology, DNA sequencing and gene therapy. Special sections include the latest on QPCR, non-isotopic detection, genetic analysis, and PCR and the world of business, which includes a behind-the-scenes look at the legal battles between biotech giants Cetus and DuPont. It also provides insights into the origins of PCR and the history of nucleic acid research.

Contenuti

One: Methodology.- I. Basic Methodology.- 1. Manipulation of DNA by PCR.- 2. Cloning PCR Products.- 3. Optimization of Multiplex PCRs.- 4. Preparation of Nucleic Acids for Archival Material.- 5. PCR Amplification of Viral DNA and Viral Host Cell mRNAs in Situ.- II. Quantitation.- 6. Quantitative PCR: An Overview.- 7. Quantification of DNAs by the Polymerase Chain Reaction Using an Internal Control.- 8. RT-PCR and mRNA Quantitation.- 9. Analysis of Human T-Cell Repertoires by PCR.- III. Nonisotopic Detection.- 10. Ultrasensitive Nonradioactive Detection of PCR Reactions: An Overview.- 11. Fluorescent Detection Methods for PCR Analysis.- 12. Enzyme-Labeled Oligonucleotides.- 13. Application of the Hybridization Protection Assay (HPA) to PCR.- IV. Instrumentation.- 14. PCR Instrumentation: Where Do We Stand?.- 15. Rapid Cycle DNA Amplification.- 16. Automating the PCR Process.- V. Sequencing.- 17. PCR and DNA Sequencing.- 18. Phage Promoter-Based Methods for Sequencing and Screening for Mutations.- 19. Capture PCR: An Efficient Method for Walking Along Chromosomal DNA and cDNA.- Two: Applications.- I. General Applications.- 20. In Vitro Evolution of Functional Nucleic Acids: High-Affinity RNA Ligands of the HIV-1 rev Protein.- 21. The Application of PCR to Forensic Science.- 22. Recreating the Past by PCR.- 23. Nonbiological Applications.- II. Genetic Analysis.- 24. RT-PCR and Gene Expression.- 25. Fingerprinting Using Arbitrarily Primed PCR: Application to Genetic Mapping, Population Biology, Epidemiology, and Detection of Differentially Expressed RNAs.- 26. Genetics, Plants, and the Polymerase Chain Reaction.- III. Assessment of Therapy Effectiveness.- 27. PCR Assessment of the Efficacy of Therapy in Philadelphia Chromosome-Positive Leukemias.- 28. The Detection of Minimal Residual Disease (MRD) in Acute Lymphoblastic Leukemia Using Clone-Specific Probes Directed against V(D)J Junctional Sequences.- 29. Assessment of Therapy Effectiveness: Infectious Disease.- 30. Gene Therapy.- IV. Diagnostics.- 31. PCR and Cancer Diagnostics: Detection and Characterization of Single Point Mutations in Oncogenes and Antioncogenes.- 32. Clinical Applications of the Polymerase Chain Reaction.- 33. Infectious Diseases.- Three: PCR and the World of Business.- 34. PCR in the Marketplace.- 35. PCR and Scientific Invention: The Trial of DuPont vs. Cetus.

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